一、水质大肠菌群概述：

　　程控定量封口机是由智能电路电驱动，内部加热辊，专门用于51孔定量盘和 97 孔定量盘封膜作用，配合微生物检测试剂使用，提供简单、快速、准确的定量检测总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪（耐热）大肠菌群、肠球菌和绿脓假单胞菌的实验方案；51 孔定量盘和 97 孔定量盘是基于传统方法Z大可能数 (MPN) 统计模型而设计的半自动定量方法，可定量检测出水样结果，这种方法可以替代并优于传统（滤膜、及多管发酵）方法检测水中微生物。

　　二、酶底物法检测仪器 适用范围:

　　用于水样中的绿脓假单胞菌群、肠球菌、总大肠菌群和粪大肠杆菌、大肠埃希菌、菌落总数的快速检测、可野外携带、应急、定量检测。

　　三、程控定量封口机产品描述：

　　酶底物法检测装置由程控定量封口机、51 或 97 孔定量检测盘、100mL定量瓶、酶底物法检测试剂四部分组成，检测水样范围:饮用水、源水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、废水、食品水、畜牧用水、医疗用水等。

　　四、总大肠菌群优势特点：

　　酶底物法为 GB5750-2006 及HJ1001-2018收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的方法，目前以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

　　相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到 24 小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，减少重大公共安全事故的发生几率。 以GB5750-2006 中总大肠菌群测定为例，比较三种方法，如表所示。

　　五、粪大肠菌群方法优势：

　　1.无需在无菌室内操作。

　　2.手工操作时间小于 1 分钟。

　　3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。

　　4.24小时即可完成定性定量分析，无需验证试验。

　　用于GB5750-2006，HJ1001-2018固定底物技术（DST）酶底物法的MMO-MUG培养基配套使用程控定量封口机，检测水样用（51孔定量盘）或（97孔定量盘）封装。

　　六、技术参数

　　七、51孔和97定量盘操作说明

　　51孔和97孔定量盘灭菌消毒

　　定量盘与DST酶底物法配合使用，定量检测100ml水中微生物，将DST-酶底物法试剂与检测水样混合后加入到51孔或者97孔定量盘中，使用程控定量封口机封膜，根据检测不同项目的培养温度和时间进行培养（24H），数出显阳性的孔格，对照MPN表读结果。

　　【工作原理】

　　加入含有总大肠菌群细菌的水样，目标细菌在Minimal Medium ONPG-MUG培养基中36℃±1℃培养，总大肠菌群细菌产生的特异性生物酶β一半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG,使培养呈现黄色；同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性的β一醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的荧光底物MUG，产生特征性荧光。同样原理，耐热大肠菌群(粪大肠菌群)在44.5℃培养时会分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG，使培养基呈现黄色。

　　【使用方法】

　　①定性测试：

　　步、在100ml水样中加入试剂，溶解，36℃±1℃培养24h；

　　第二步、结果判读

　　无色=阴性

　　黄色=总大肠菌群阳性

　　黄色+荧光=大肠埃希氏菌群阳性

　　注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色为阳性

　　②定量检测

　　步、在100ml水样中加入试剂，溶解；

　　第二步、倒入51孔定量检测盘（定量孔板）或97孔定量检测盘（定量孔板）中；

　　第三步、用程控定量封口机对定量检测盘（定量孔板）进行封膜，36 ℃±1℃培养24h；

　　第四步、定量检测盘（定量孔板）结果判读：

　　无色=阴性

　　黄色格子=总大肠菌群阳性

　　黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性

　　查对照MPN表计数

　　注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数。