【摘　要】目的　研究不同含锌饲料对生长大鼠学习记忆的影响及与其脑中、锌和钙含量的关系, 以确定维持大鼠*佳学习记忆状态的补锌范围。方法　以含锌量为20、50、100、200、400和800m gökg的饲料饲喂88g左右的W ista r大鼠, 雌雄各半; 以避暗法测试各组实验动物学习记忆能力, 并以放免法测定了脑组织; 以原子吸收光谱法测定脑组织锌和钙含量。结果100m gökg和200m gökg的饲料锌含量, 使大鼠学习记忆功能*好, 而较低和较高的饲料锌水平对学习记忆功能均有不同程度的不利影响; 同时较低和较高的饲料锌水平使下丘脑、海马和大脑皮层水平都有不同程度的降低; 另外, 较低的饲料锌水平可使血液锌、海马、大脑皮层和下丘脑锌水平一致性地降低, 同时使大脑皮层钙含量降低。结论　100～200m gökg饲料锌含量, 对维持大鼠学习记忆功能是*适的补锌范围, 这与大鼠脑组织较高的、锌和钙水平一致。

关键词: 　锌; 　学习; 　; 　钙　　我们已报道的实验结果表明, 饲喂缺锌饲料可降低大鼠的学习记忆功能; 另有实验表明, 在每公斤饲料含锌1000m g的高锌条件下, 幼鼠学习记忆功能及其海马结构受损。然而, 尚未见从有助于学习记忆的角度, 阐述*适补锌量或补锌范围的研究报道。本实验的目的, 主要是从学习记忆的角度, 阐述*适的补锌范围, 并探讨补锌量与脑中、锌和钙的关系。

1　材　料　与　方　法

. 1　实验动物分组与饲养

　　采用88g左右的W ista r大鼠72只, 雌雄各半, 随机均分为6组, 每组12只, 分别饲喂含锌20、50、100、200、400和800m gökg的饲料, 各组均为自由摄食, 自由饮水。饲养期间, 严格防止金属元素污染, 所用不锈钢笼具冲洗, 饲料和饮水玻璃罐经去离子水浸泡冲洗, 饮水为去离子水, 整个实验期30d。

1. 2　实验饲料

　基础饲料的配制参照我们原来的方法略有改进, 大豆蛋白经0. 5% ED TA 纯水去掉一部分锌,其组成为(gö10kg): 蔗糖6 500,纯化大豆蛋白1900,植物油1 000,混合盐(584 g混合盐中含:CaH PO4 274g, CaCO3 98g,N a2HPO4 69g,N aC l38g, KC l69g,M gSO4 29g, K IO3 0. 1 g, CuSO4·5H2O0. 1 g,M nSO4 2. 0 g, F eSO4·7H2O2. 5 g),(16g中含:B1 24m g,B2 60m g,B6 30m g, 200m g, 肌醇1000m g, 400m g, 20m g, 20m g,B120. 2m g,V K100m g, 10 000m g,V E600m g,V A20万IU ,V D4万IU)。配成的饲料经原子吸收光度计检测,含锌量为20. 0m gökg, 稍高于有关资料报道的大鼠对 锌的*低需要量(12. 0m gökg), 但未达到A IN276饲料的推荐量(30. 0m gökg), 其他各组的饲料以硫酸锌的形式添加锌到基础饲料中, 以得到各组所需的锌水平。

1. 3　检测指标

1. 3. 1　生长状况: 　实验开始时**次称重, 以后每7d的同一时间称重一次, 以检测各组大鼠的生长情况。

1. 3. 2　学习记忆功能的测定: 　测试装置为避暗箱, 在饲养实验到22日龄时, 进行“训练”, 将大鼠放入明室, 记录大鼠四肢全部进入暗室时在明室停留的时间称为进洞潜伏期, 当大鼠进入暗室, 即刻通电(电压50V), 电击的大鼠逃回明室, 经30s后将大鼠取出,“训练”后的第7d即进行“考核”, 再将大鼠放入明室, 并观察进洞潜伏期。学习记忆能力, 主要根据“考核”与“训练”的潜伏期的变化, 我们在“考核”和“训练”时均观察5m in, 在“考核”时, 5 m in内不进入暗室的大鼠为“记忆良好”,“考核”时进洞潜伏期减去“训练”时进洞潜伏期的差值, 大于30s者为“记忆中等”, 差值小于30s者为“记忆差”。1. 3. 3　脑区含量测定: 　每组各抽取6只大鼠(雌雄比例相同)的端脑, 在沸生理盐水中煮5m in, 以灭活酶, 保持神经肽的稳定, 然后分出皮层、海马和下丘脑, 分别称重后, 置于玻璃匀浆器内, 加入1m o löLH C l1m l充分匀浆后倒入塑料指形管中, 在室温中放置100m in, 使生物活性肽充分溶解在酸中, 然后加入1m o löLN aO H1m l中和酸4 000röm in离心10m in, 取上清, 按**军医大学神经生物学实验室提供的药盒说明书测定含量。

1. 3. 4　外周血浆锌含量和脑区锌和钙含量测定: 　收集血浆样品直接稀释, 以原子吸收光度法测定, 另外每组各抽取6只大鼠(雌雄比例相同)的端脑, 分离出皮层、海马和下丘脑, 分别称重, 然后以混合酸(硝酸: 高氯酸= 5∶1)湿化消化, 以原子吸收光谱法测定其中的锌和钙的含量。

2　结　果

2. 1　各组大鼠的生长状况

　　各组大鼠各阶段的体重见表1,经方差分析和多重比较, 只在实验的14d时, 与20m gökg组比较, 400 m gökg组开始出现显著性差异, 与其他组在各阶段均差异不显著。800m gökg组在前2w k内有增重降低的趋势, 但随后则能赶上增重速度。2. 2　各组大鼠的学习记忆功能

　　根据避暗反应, 测得各组大鼠的学习记忆功能的结果见表2。从结果看出, 添加100m gökg和200m gökg锌的两个组学习记忆功能*好、经V2检验,它们与20m gökg组, 差异显著(P< 0. 05)。50m gökg、400m gökg和800m gökg等组与*佳的两组比较, 也有一定的差距。说明在50m gökg以下和400m gökg以上的饲料锌浓度时大鼠的学习记忆功能不理想。