HPLC方法建立期间，在次进样前，我们必须有把握所选择的检测器能检测到所有的被测样品组分。通常可变波长紫外(UV)检测器，因这种检测器使用方便，且可用于大多数样品。uV光谱信息对方法建立具有举足轻重的地位，uv光谱数据可从文件使用”pdf Fact ory”试用版本创建文献中查找，也可通过所测样品成分的化学结构估算；直接测得（如果可拿到化合物纯品）或在HPLC分离期间用二极管阵列检测器(PDA）得到。样品对uv检测响应不足时，町考虑使用其它类型检测器(荧光，电化学等)，或衍生化样品使检测信号增强。
 

          样品来源形式不同，可能以如下形式出现：
          1．可直接进样的溶液
          2．需稀释、pH缓冲、加入内标或其它定容操作的溶液
          3．必须首先溶解或提取处理的固体
          4．样品需预处理以除去十扰物和／或保护色谱柱或仪器不受损害
          可直接进样的样品有操作方便、精密度好的优点，然而大多数HPLC分析的样品需称重和／或稀释定容后才能进样。当样品溶剂成分接近于流动相时，一般不会产生基线波动等问题，通常能够得到较好的结果。
          有些样品在注人HPLC前需进行部分分离（预处理），以除去干扰物、浓缩样品或消除“柱杀手”，因此了解样品基质和各种被测物的浓度范围非常重要。许多情况下，建立满足要求的样品预处理方法甚至比完成一次良好的HPLC分离更具挑战性。