化学发光分析又称化学发光免疫分析(CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridinium ester(AE),是有效的发光标记物,其通过起动发光试剂作用而发光,强烈的直接发光在一秒钟内完成,为快速的闪烁发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析,其化学反应简单、快速、无须催化剂;检测小分子抗原采用竞争法,大分子抗原则采用夹心法,非特异性结合少,本底低;与大分子的结合不会减小所产生的光量,从而增加灵敏度。
化学发光分析仪发光酶免疫分析法：
从标记免疫分析角度,化学发光酶免疫分析(chemi luminescent enzyme immuno assay,CLEIA ),应属酶免疫分析,只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析相同:以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体)进行免疫反应,免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光,用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP),它们有各自的发光底物。
发光试剂
HRP标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺(32氨基邻苯二甲酰肼,luminol),或其衍生物如异鲁米诺(42氨基邻苯二甲酰肼),是一类重要的发光试剂。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,在过氧化物酶及活性氧存在下,生成激发态中间体,当其回到基态时发光,其波长为425nm。
早期用鲁米诺直接标记抗原(或抗体),但标记后发光强度降低而使灵敏度受到影响。近来用过氧化物酶标记抗体,进行免疫反应后利用鲁米诺作为发光底物,在过氧化物酶和起动发光试剂作用下,鲁米诺发光,发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。
